④薄层色谱法
取胶囊内容物50mg于分液漏斗中,劲骨胶囊鉴别及加水10mL溶解,功效加石油醚(30~600C)20mL,成分振摇,盐酸静置分层,氨基取下层液过滤,葡萄作为样品溶液;取盐酸氨基葡萄糖对照品10mg,糖含加水5mL溶解,量测作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物50mg,劲骨胶囊鉴别及与样品同法制成阴性样品溶液。功效
取上述3种溶液各3~5μL,成分分别点于同一硅胶G薄板上,盐酸以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水=(4:1:1:2,氨基V:V:V:V)为展开剂(按展开剂体积1mL加入1mg茚三酮,葡萄混匀),糖含展开,取出,晾干,600C烘箱加热10min,至斑点显色清晰,在日光灯下检视。
(2)白芍提取物鉴别
取胶囊内容物2g,加乙醇40mL,超声提取20min,过滤,滤液水浴蒸干,残渣加水20mL溶解,加水饱和正丁醇溶液振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加乙醇1mL溶解,作为样品溶液;取白芍对照提取物1g,加乙醇30mL,与样品同法制成对照提取物溶液;取白芍对照药材0.5g,加乙醇10mL,与样品同法制成对照药材溶液;取芍药苷对照品适量,加乙醇制成1mg/mL溶液,作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含白芍及白芍提取物胶囊内容物2g,与样品同法制成阴性样品溶液。
取上述5种溶液各5~10μL分别点于同一硅胶G薄板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2,V:V:V:V)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%(g/mL)香草醛硫酸溶液,650C烘箱加热10min,至斑点显色清晰,在日光灯下检视。
(3)碳酸钙鉴别
①稀盐酸反应法
取胶囊内容物0.2g,于10mL试管中,作为样品;取对照品碳酸钙0.1g,于10mL试管中,作为对照品;按样品配方和工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物0.2g,与样品同法制成阴性样品。在上述3支试管中分别滴入稀盐酸试液,观察反应。
②草酸铵试液沉淀法
取胶囊内容物2.5g,于坩埚中先炭化,转入6000C高温马弗炉中炽灼3~4h,残渣加15mL稀盐酸试液溶解,过滤至50mL具塞试管中,加1滴甲基红试液,用氨试液调至黄色,再加数滴稀盐酸试液使呈酸性,作为样品溶液;取碳酸钙对照品0.6g于50mL具塞试管中,加15mL稀盐酸试液溶解,与样品同法制成对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物2.5g,与样品同法制成阴性样品溶液。
在上述3支试管中分别滴加草酸铵试液,观察反应现象和颜色(稀盐酸、甲基红、氨试液、草酸铵试液参考中国药典四部配制)。
(4)维生素K1鉴别
取胶囊内容物2g,于三角瓶中,加0.03mol/L盐酸溶液5mL,600C超声提取10min,加无水乙醇30mL,继续超声20min,取出,放至室温,转移至50mL容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀,作为样品溶液;取维生素K1对照品适量,加无水乙醇溶解,制成2μg/mL,作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含维生素K1胶囊内容物2g与样品同法制成阴性样品溶液。
将上述3种溶液用0.22μm滤膜过滤,采用高效液相色谱仪测定。
色谱柱C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇100%;检测波长248nm;柱温300C;进样量10μL。
(5)维生素D3鉴别
取胶囊内容物5g,于具塞试管中,加0.02%(mL/mL)氨水溶液10mL和无水乙醇25mL,60℃超声提取10min,取出,放至室温,吸取正己烷10mL于试管中,摇匀,倒入离心管中,3000r/min离心10min,取上层正己烷作为样品溶液;取维生素D3对照品适量,加正己烷溶解,制成0.8μg/mL,作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含维生素D3胶囊内容物5g,与样品同法制成阴性样品溶液。
将上述3种溶液用0.22μm滤膜过滤,采用高效液相色谱仪测定。
色谱柱:硅胶柱(3.9mm×150mm,5μm);流动相:正己烷-环己烷-异丙醇(50:50:0.8,V:V:V);检测波长265nm:柱温:30℃;进样量:20μL。
(6)盐酸氨基葡萄糖含量测定
精密称取胶囊内容物20mg,于三角瓶中,先加1mL乙腈使样品湿润分散,再加适量水超声提取5min,取出,放至室温,转移至25mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,作为样品溶液;精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品10mg,于25mL容量瓶中,先加1mL乙腈湿润分散,用水定容至刻度,摇匀,制成400μg/mL对照品溶液。
将上述2种溶液用0.22μm滤膜过滤,采用高效液相色谱仪测定。
色谱柱:C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%(mL/mL)磷酸(三乙胺调至pH3.0)(4:96,V:V);检测波长:95nm;柱温30℃;进样量:10μL。
方法学验证:参照中国药典四部药品质量标准分析方法验证指导原则进行。
三、结果与分析
1、鉴别盐酸氨基葡萄糖
(1)碱性酒石酸铜反应法
取胶囊内容物200mg,于10mL试管中,加水5mL溶解,作为样品溶液;取盐酸氨基葡萄糖对照品0.1mg,与样品同法制成对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg,与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察,样品和对照品溶液生成红色Cu2O沉淀,阴性样品溶液则无此反应,如图2所示。化学反应式如下:C6H12O6+2Cu2++4OH-=C6H12O7+Cu2O↓(红色)+2H2O。
(2)硝酸银反应法
制法与碱性酒石酸铜反应法相同,在水溶解的3支试管中,加入数滴稀硝酸试液,使呈酸性,滴加硝酸银试液,观察反应颜色,样品和对照品溶液生成白色絮状AgCl沉淀,阴性样品溶液则无此反应,如图3所示。化学反应式如下:HCl+AgNO3=AgCl↓(白色)+HNO3。
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但湖人找到了赢球的方法“双十二”没有雪梨:淘宝店被封,被曝“不给员工交社保”调查 | “下头塌房”争议中,谁依然爱着“顶流”玲娜贝儿?KD成第9位单场得分50+的篮网球员 欧文曾有2场陈亚楠被电影导演看上 想收她为徒 给她安排电影角色三分纪录将被破阿伦发声 仍希望得到尊重曼联有意菲利克斯 朗尼克视其为重建计划一部分拼多多越来越“土”,农货越来越“潮”庄神:留在湖人已经没意义 到76人是最佳选择贝纳蒂亚:C罗为了成功 可以牺牲所有的家庭生活18场造15球!C罗成曼联大腿 朗尼克立他为核心调查 | “下头塌房”争议中,谁依然爱着“顶流”玲娜贝儿?半场16分全场贡献26+8 大将缺阵状元秀成老大联想总部或迁至武汉老詹展现超能力!扣篮+盖帽率队轰29-6高潮他俩真是娱乐圈夫妻相黑马了曼联名宿:C罗和拉什福德无可替代 应该一直首发KD成第9位单场得分50+的篮网球员 欧文曾有2场皮!老詹连续轰13分之后 竟然捡对手眼镜戴12月13日美原油交易策略:油价有望再走强北青:京穗大战变了味!和“冠军”字眼不沾边庄神:留在湖人已经没意义 到76人是最佳选择这剧组有毒吧!从杨紫到张慧雯,资本逐利的操控从未停止庄神:留在湖人已经没意义 到76人是最佳选择日本汽车厂商相继推出残障人士用驾驶装置目标不止2025!英特尔公布“赶超三星台积电”战略:3D堆叠晶体管IPO雷达 | 核心产品专利靠授权,尚无产品上市,新通药物冲科创板有戏吗?墨尔本联现场DJ调侃周琦引争议 遭NBL官方调查土媒:贝西克塔斯想签中国球员 头号目标是韦世豪【一周新基】“稳”字预期下,提前布局跨年行情该选哪只新品?“借鸡生蛋”年入12亿,知网的买卖早该结束了!旗下私募基金踩雷,乐瑞资产申请华阳经贸破产清算双色球头奖4注1504万+4注879万 销量5.09亿排第4生鲜杂货配送商Instacart总裁入职仅三个月后宣布离职前上海外援有意重返CBA 与中上游球队取得联系“双十二”没有雪梨:淘宝店被封,被曝“不给员工交社保”点球之夜!英超4大豪门全靠绝杀点球获胜欧洲央行本周面临多重压力,欧元兑美元展现悲观信号奥斯卡赛季首球!禁区内胸部停球+过人 灵性捅射庄神:留在湖人已经没意义 到76人是最佳选择张敏被曝已结婚 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活塞球迷还忍心嘘他卡纳瓦罗祝福郑智:崭新的教练征程一切顺利!目标不止2025!英特尔公布“赶超三星台积电”战略:3D堆叠晶体管穆帅:我们是意甲射门最多的球队 伤病目前太多了那些回农村卖水果的年轻人帕金斯:MVP候选人不同于联盟前5 老詹仍是前5前上海外援有意重返CBA 与中上游球队取得联系虫口夺粮 18亿亩农田上的持久战朗尼克不会让C罗轮休 对他的态度与跑动很满意曝步行者有意塞克斯顿 赛季已报销又到合同年2022年提前批专项债额度已下达 拍照搜题作业APP被下线 | 财经晚6点曼联名宿:C罗和拉什福德无可替代 应该一直首发克洛普:我不会永远在这 希望杰拉德未来执教红军小马智行主动暂停加州全无人车测试英特尔将投资70亿美元扩大马来西亚芯片封装工厂产能为她们叹了十年不值得曼联有意菲利克斯 朗尼克视其为重建计划一部分周迅黄磊《小敏家》开播,中年玛丽苏神剧总算有救了那些回农村卖水果的年轻人日本最辣最狂野公主?抽烟文身谈四角恋,狂欢到深夜2点震撼全国武汉队迅速扳平比分!蒿俊闵角球助攻 杨博宇头槌财说|长江电力募资1246亿收购两座巨型电站,市场会买单吗?博格巴当年1亿转会曼联 拉伊奥拉的佣金超4千万张敏被曝已结婚 只穿睡衣被小10岁老公强迫出镜艾克森今日启程返回巴西 表态若国足需要肯定回来目标不止2025!英特尔公布“赶超三星台积电”战略:3D堆叠晶体管互联网大厂纷纷精简人员?转型路碰上裁员潮互联网未来该咋看?18场造15球!C罗成曼联大腿 朗尼克立他为核心皮!老詹连续轰13分之后 竟然捡对手眼镜戴降维打击!周琦砍全场最高22+10 7盖帽遮天蔽日特斯拉儿童版Cyberquad成爆款 遭黄牛抬价近9倍庄神:留在湖人已经没意义 到76人是最佳选择曝国米将与桑切斯解约 后者希望1月重返巴萨火箭客战遭遇飓风天气 凌晨迫降背靠背太难了朗尼克:曼联会踢进攻足球 要更多的向前传球米尔斯本季82记三分排篮网第一!还创一里程碑人民快评:没想到“浓眉大眼”的星巴克也沦陷了因疫情反复 THE9毕业演唱会广州站取消土媒:贝西克塔斯想签中国球员 头号目标是韦世豪老牌明星太敬业!十年不吃米,60岁一身腱子肉,年轻演员学着点柔宇科技:至暗时刻 路在何方?北青:京穗大战变了味!和“冠军”字眼不沾边朗尼克:曼联会踢进攻足球 要更多的向前传球武汉队迅速扳平比分!蒿俊闵角球助攻 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